介绍牛卵巢保存和卵母细胞体外成熟研究的背景和现状
明确研究牛卵巢保存时间对卵母细胞体外成熟的具体目的和意义
阐述研究对于牛卵巢保存和卵母细胞体外成熟领域的重要意义和应用前景
介绍卵母细胞体外成熟技术研究的背景和现状
阐明研究的基本思路和方法
制作卵母细胞体外成熟培养皿
使卵母细胞体外成熟培养皿平衡
将收集到的卵母细胞移到卵母细胞体外成熟培养皿
使卵母细胞体外成熟培养皿内的卵母细胞成熟
制作卵母细胞体外授精培养皿
使卵母细胞体外授精培养皿平衡
取出液氮保存的精子并进行相关处理
进行卵母细胞体外授精
使制作卵母细胞体外授精培养皿平衡
使用10ml注射器,通过抽吸法抽取牛卵巢不同保存时间的卵母细胞进行体外成熟培养22-24h。通过体式显微镜观察其卵丘扩展程度,统计卵母细胞第一极体排出率,分析其差异
使用qRT-PCR技术对卵丘扩展(PTX3、HAS2)及卵母细胞成熟相关基因(BMP15、GDF9、CyclinB1)进行检测分析
使用MⅡ期卵母细胞进行体外授精,对授精胚胎的卵裂率、囊胚率进行统计分析
使用Hoechst 33342对囊胚进行染色,统计其囊胚的总细胞数,分析其差异
通过免疫荧光技术,使用γ.H2AX抗体对牛卵巢不同保存时间MⅡ期卵母细胞进行染色,观察其DNA损伤情况,分析其差异